Etap 1:
ZAKOŃCZENIE CZĘŚCI 1 ETAPU I – POBIERANIE PRÓB
W dniu 17 grudnia zakończyła się pierwsza część etapu pierwszego – pobranie materiału do badań i izolacja pałeczek z rodzaju Campylobacter. Podczas tej części projektu trwającej ponad 4 miesiace zostały pobrane 2760 próby ze 120 stad drobiu grzebiącego, w tym: 23 próbki kałomoczu z 30 stad kurcząt rzeźnych, 23 próbki kałomoczu z 30 stad indyków rzeźnych, 23 próbki kałomoczu z 30 stad gęsi oraz 23 próbki z 30 stad kaczek.
Próby były pobierane w 8 województwach: wielkopolskim, dolnośląskim, łódzkim, lubuskim, kujawsko-pomorskim, opolskim, zachodnio-pomorskim oraz mazowieckim.
Wszystkie próby były transportowane do laboratorium w temperaturze 4°C na wymazówkach z podłożem transportowym, nie przekraczając czasu transportu wynoszącego 8 godzin.
PODSUMOWANIE 1 ETAPU
Podczas I etapu badań realizowanych w ramach projektu: „Badania nad występowaniem, charakterystyką i sposobami ograniczania Campylobacter spp. u drobiu grzebiącego i wodnego w Polsce” pobrano materiał – świeży kałomocz od 120 stad drobiu, w tym 30 stad kaczek, 30 stad gęsi, 30 stad indyków oraz 30 stad kurcząt rzeźnych. Z każdego stada pobierano 23 próbki, które transportowano do laboratorium w temperaturze 4°C (±2°C) na wymazówkach z podłożem transportowym, nie przekraczając czasu transportu wynoszącego 8 godzin. W ten sposób przebadano bardzo reprezentatywną liczbę 2760 próbek.
Zebrane próbki posiewano na płytki, które następnie inkubowano w temperaturze 41,5°C przez 48 godzin w warunkach mikroaerofilnych. W celu bieżącej kontroli warunków mikroaerofilnych, równocześnie z próbkami wysiano szczep wzorcowy Campylobacter jejuni WDCM 00005.
Następnie kolonie podejrzane o przynależność do rodzaju Campylobacter izolowano na podłoże Columbia Blood Agar i inkubowano kolejne 48 godzin w warunkach mikroaerofilnych. Na tym etapie inkubowano również szczep kontrolny Campylobacter jejuni.
Celem identyfikacji wyizolowanych szczepów i potwierdzenia przynależności do rodzaju Campylobacter wybierano po 3 typowe kolonie Campylobacter i sprawdzano cechy morfologiczne i biochemiczne. W celu potwierdzenia i porównania wyników, testy wykonywane były także na szczepach wzorcowych Campylobacter jejuni WDCM 0005 (kontrola dodatnia) i Escherichia coli WDCM 00013 (kontrola ujemna).
Identyfikację przynależności wyizolowanych szczepów Campylobacter do gatunku prowadzono z zastosowaniem metody PCR
Materiał genetyczny poszczególnych szczepów Campylobacter został wyizolowany z 48 godzinnej hodowli w warunkach mikroaerofilnych szczepów Campylobacter. Po upływie tego czasu próbki schładzano w temp. -20°C przez okres 15 minut. Uzyskana zawiesina została poddana wirowaniu, a powstały supernatant przenoszono do jałowych probówek typu eppendorf. Stężenie DNA w otrzymanym produkcie zostało zbadane przy użyciu spektrofotometru. Uzyskany materiał genetyczny Campylobacter został zabezpieczony i przechowywany w temp. -20°C do dalszych badań.
Wszystkie dodatnie izolaty z potwierdzoną przynależnością do rodzaju Campylobacter i gatunku C. jejuni lub C. coli zostały zabezpieczone do dalszych badań.
I etap badań został zrealizowany w całości.